Evaluarea imunității reînnoirii scroafelor într-o fermă PRRS stabilă

Se propune urmărirea scroafelor de înlocuire printr-un program de prelevare de lichide orale.

Printre numeroasele studii care vizează aprofundarea cunoștințelor PRRS la porci, a fost propusă recent o nouă abordare a estimării pe teren a răspunsului imun prin analiza anticorpilor specifici din salivă. Această metodă de diagnostic este foarte interesantă, deoarece permite colectarea ușoară cu metode neinvazive, respectând bunăstarea animalelor. De asemenea, economisește timp de lucru considerabil pentru personalul din fermă în comparație cu prelevarea de sânge, care este dificil de efectuat la animale foarte mari.

Studiul a fost realizat într-o fermă de scroafe, stabilă în PRRS, al cărei obiectiv este să vândă porci între 30 și 35 kg greutate în viu. Numărul de scroafe în producție este de cel mult 350-400. El a fost pozitiv pentru PRRS de ani de zile și o vaccinare inițială a efectivului de reînnoire se efectuează cu un vaccin viu atenuat în jur de 140 de zile de viață și un rapel cu un vaccin inactivat 3 săptămâni mai târziu.

Schița studiului

Am selectat 8 sâmburi de reînnoire din 3 grupuri consecutive care au fost identificate, adăpostite împreună și eliminate la următoarele vârste: T1 = ziua 1 (ziua următoare sosirii într-o cameră separată de fermă), T2 = ziua 49 (ieșirea din cameră pentru a merge până la creștere), T3 = ziua 63, T4 = ziua 77, T5 = ziua 91 și T6 = ziua 105. În fiecare probă, sângele și fluidele orale (saliva) au fost luate din grup folosind o frânghie.

Colectarea salivei într-o cameră separată de ferma de scroafe a doua zi după sosirea lor.

Recolta la ieșirea din camera de sosire pentru a merge la reproducere

Recoltați la sfârșitul experimentului în cutie. Prezentarea manuală a coardei

Starea clinică a scrofelor a fost satisfăcătoare pe tot parcursul experimentului, precum și parametrii de producție și reproducere ai fermei în timpul anului în care au fost efectuate testele pe teren (avorturi, rate de fătare, înțărcători/scroafă/an). Sămânțele examinate au fost infectate cu virusul PRRS la 7-9 săptămâni de la sosirea la fermă (Tabelul 1). Cinetica formării de anticorpi serici a coincis cu cea a anticorpilor IgA și IgG din fluidele orale din grupele 1 și 2. În grupa 3, aceasta a fost corelată doar cu IgG în salivă.

Cu toate acestea, nu a fost detectată nicio pozitivitate la RT-PCR în timp real, nici în serul animalelor, nici în lichidul oral (saliva) al grupului.

Tabelul 1: Răspunsul anticorpilor (sânge și fluide orale) la virusul PRRS

Eșantion 1 (0 zile)	Proba 2 (49 d)	Proba 3 (63 d)	Proba 4 (77 d)	Proba 5 (91 d)	Proba 6 (105 d)
Ser: medie s/p	0	0,35	NĂSCUT	0,92	0,76	0,86
Sere pozitive/totale	0/8	3/8	NĂSCUT	8/8	7/8	8/8
LO: test IgA s/p	0 (NEG)	0,61 (POS)	NĂSCUT	0,49 (DOU)	0,87 (POS)	0,75 (POS)
LO: test IgG s/p	0,10 (NEG)	1,83 (POS)	NĂSCUT	1,04 (POS)	1,16 (POS)	1,06 (POS)

Proba 3 (63 d)

Proba 1: A doua zi după sosire într-o cameră separată de fermă.
Eșantionul 2: la ieșirea din camera de sosire și trecerea la reproducere după 7 săptămâni.
Mostră 3-6: la fiecare două săptămâni până la a 105-a zi de sosire (4,5 luni de viață).
Această schemă experimentală a fost realizată pentru a arăta momentul infecției știind că în primele 7 săptămâni nu a existat niciun contact cu virusul.
LO: lichid oral
NEG: negativ
POS: pozitiv,
DOU: dubios

discutie si concluzie

Controlul sanitar al PRRS bazat pe colectarea fluidelor orale s-a dovedit a fi precis și în timp util, cu cerințe logistice și organizaționale foarte reduse comparativ cu recoltarea individuală de sânge. Datele arată, de asemenea, că unul sau două animale seropozitive dintr-un grup de 8-10 pot fi suficiente pentru a colecta pozitiv lichide orale din grup. În acest sens, nu a existat o întârziere substanțială în diagnostic comparativ cu serologia. Trebuie subliniat faptul că colectarea fluidelor orale prin intermediul unei frânghii trebuie să fie modulată în funcție de vârsta animalelor (sau de mărimea acestora), fie în timp, fie în modul de expunere.

În studiul nostru, detectarea răspunsului anticorpilor în lichidul oral a fost demonstrată a fi mai robustă decât detectarea virusului din sânge sau fluid oral prin RT-PCR. Trebuie remarcat faptul că aclimatizarea scrofelor din acest complex se realizează în două etape: A) primele 7 săptămâni într-o cameră separată de ferma de scroafă fără recirculare virală; B) perioada în casa de serviciu în care contactul cu animalele se face în condiții cu circulație virală foarte redusă. În aceste condiții de presiune infecțioasă foarte redusă, scrofele nu au fost niciodată pozitive prin PCR în timp real din diferite motive posibile: 1) timpul de colectare a probelor nu a coincis cu un vârf de viremie, 2) sonda utilizată a fost foarte diferită virus circulant (deși a fost validat în fermă înainte de studiu), 3) degradarea ARN-ului viral înainte de eșantion, în ciuda precauțiilor luate.

Este interesant de observat că testul IFN-gamma (Dotti și colab., 2011; imunitatea măsurată de celule la virusul PRRS) dă rezultate în conformitate cu testele de anticorpi prezentate în tabelul 1 (date nepublicate). Prin urmare, în fermele stabile, este rezonabil să ne așteptăm la stabilizarea pozitivității anticorpilor în timp, care ar trebui să ducă la titruri s/p moderate și la echilibru după răspunsul IgA și IgB în fluidul oral. Condițiile de mai sus nu apar la turme instabile care au cicluri repetate de infecție (vezi Figura 1). În aceste condiții de instabilitate, schema de control propusă va dezvălui ciclurile succesive ale viremiei și ale răspunsului la anticorpi atât în sânge, cât și în salivă, asociate cu lipsa răspunsului imunitar măsurat de celule (testul IFN-gamma).

Figura 1: Infecția cu virusul PRRS într-o fermă instabilă.

Testul pe teren într-o fermă instabilă a fost publicat anterior (Dotti și colab., 2013). Acesta este un studiu de cohortă într-un grup de scroafe de înlocuire. Graficul A arată numărul de scrofițe cu și fără viremie în momente diferite. Graficul B arată schimbarea titrului anticorpului seric în timp. Săgețile din graficul A arată cele 3 valuri succesive de infecție care au avut loc în fermă.